尊龙凯时的研究团队开展了一项关于大鼠原代脂肪间充质干细胞提取的实验,以下是实验材料准备及操作步骤的详细介绍。
1. 实验材料准备
本实验优选2周龄或体重约200克的SD大鼠作为实验对象。准备的器械包括灭菌的镊子、眼科直剪及眼科弯剪、磁珠等,同时还需准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。此外,75%乙醇用于全面的消毒。无菌PBS水、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛以及无菌培养瓶等也是必不可少的材料。用于培养的基质为SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。
2. 实验操作步骤
将所需物品置于超净工作台上,并进行紫外线消毒30分钟。接下来,配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶,并通过过滤进行除菌处理。将大鼠通过颈部脱颈处死后,立即浸泡在75%酒精中2-3分钟,然后固定于泡沫板上,接着剪开大鼠的腹股沟皮肤,暴露脂肪组织。在剪取脂肪组织时需谨慎,避免切到血管,同时将剪取的组织放入PBS中进行清洗,去除多余的血管和淋巴结。
将脂肪组织剪碎至合适大小(如2mm×2mm),然后加入胶原酶,在37℃的环境下进行消化,每隔5分钟进行轻摇或持续搅拌。消化完成后,将细胞悬液转移至离心管中,进行离心,随后弃去上层的脂滴泡沫及上清液,并用培养基重悬沉淀。之后,过滤细胞悬液,再次离心后弃去上清液,最后用培养基重悬并接种到培养瓶中。
培养瓶应放置在37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。
3. 注意事项
在实验过程中,务必保持无菌操作,以防止细胞污染。脂肪组织的剪取及清洗步骤需认真对待,避免对细胞造成损伤或引入杂质。在消化期间,需严格控制时间和温度,以避免过度消化导致细胞受损。此外,离心和过滤过程中应采用轻柔手法,防止细胞流失或破裂。
综上所述,通过严格遵循以上步骤和注意事项,可以有效提取大鼠的原代脂肪间充质干细胞,这一过程对生物医疗研究具有重要意义,期待尊龙凯时在细胞生物学领域的进一步突破。