目的细胞应按照标准细胞培养方案在血清培养基中进行培养。在检测的前一天，需使用无血清培养基（0.2% BSA）进行细胞处理。经过一夜在无血清培养基中的培养后，吸出细胞培养基并用 PBS 冲洗。接着，加入胰蛋白酶溶液，启动细胞分离过程。将细胞悬液转移至试管中，以 350×g 的速度离心 5 分钟。随后，将细胞重新置入预热的细胞培养基中，并将细胞悬浮液稀释至 100,000 个细胞/ml 的接种密度。

接下来，向接收板的每个孔中加入 200μl 的培养基，过程中可以选择是否添加化学引诱剂，比如不同浓度的 FCS（从 0.25% 到 10%）。将之前准备好的细胞悬液以 50μl 的量加入膜板的各个孔中，然后将细胞培养板放置在 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养 24 小时。

在培养结束后，从接收板的各个孔中吸出细胞培养基，随后向每个接收孔中加入 150μl 的无血清培养基和 8μM 的钙黄绿素 AM（在 DMSO 中稀释）。继续在 37°C、5% CO2 的细胞培养箱中孵育 45 分钟。之后，从膜板及接收板的每个孔中吸出细胞培养基，并用 PBS 冲洗两个板的孔。接着加入胰蛋白酶溶液，以促进膜下侧迁移的细胞开始脱离。让胰蛋白酶溶液孵育 10 分钟，轻轻摇动。接下来，将每孔 180μl 的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色 96 孔微孔板中，并在激发波长 485nm 和发射波长 520nm 的荧光读板器中读取荧光信号。

进一步，从膜板各孔吸出培养基，并使用预湿的棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转，以去除膜上部未迁移的细胞。最后，利用绿色通道荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。此外，ThinCert® 96 孔 HTS 小室由于其独特的孔结构提供高透明度，有助于活细胞观察，以检查细胞形态、评估细胞融合并更高效地进行污染监测。因此，在每次实验中，我们都会进行细胞的连续显微镜监测。

在探索更优质的生物标志物、治疗靶点和干预肿瘤转移、血管生成及炎症性疾病等复杂现象时，体外细胞迁移实验已成为一种不可或缺的工具。这些实验为测量细胞迁移和分析生长因子、趋化因子或候选药物等不同分子的影响提供了一个可控的环境。在进行迁移实验时，孔径的精确选择至关重要。孔径必须与研究的细胞尺寸成比例，既需足够小以限制细胞的被动移动，又需足够大以促进主动迁移。因此，了解细胞迁移的整体机制对于研究与之相关的病理现象至关重要，并为使用尊龙凯时的先进技术提供了良好的基础。