尊龙凯时致力于在生物医疗领域提供高效的实验方法，本文将详细介绍如何使用CaCl2法制备大肠杆菌的感受态细胞。

1. 目的

学会如何运用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞，以增强细胞对外源DNA的吸收能力。

2. 原理

在0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌会膨胀成球形，并失去部分膜蛋白，从而进入一种特别的状态，便于吸收外源DNA。

3. 器材

进行此实验需要以下器材：旋涡混合器、微量移液取样器、移液器吸头、50ml和15ml的微量离心管、双面微量离心管架、台式冷冻离心机、制冰机、恒温摇床、分光光度计、超净工作台、恒温培养箱、摇菌试管、三角烧瓶及接种环。

4. 试剂

实验所需试剂包括Ecoli XL1-Blue、LB培养基、0.1mol/L CaCl2溶液以及无菌水（ddH2O）。

5. 实验准备

将15ml离心管放置在铝制饭盒中进行灭菌，同时将移液器吸头放入相应的吸头盒中灭菌。确保平板培养基、LB培养基、冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液、无菌ddH2O、摇菌试管和三角烧瓶均经过灭菌处理。

6. 操作步骤

(1) 在超净工作台中，取一支无菌摇菌试管，加入2ml不含抗菌素的LB培养基。

(2) 从超低温冰柜中取出XL1-Blue菌种，放置于冰上。在超净工作台中，使用烧红的接种环插入冻结的菌中，然后接入含2ml LB培养基的试管中，37℃摇床培养过夜。

(3) 将0.5ml上述菌液转接到含有50ml LB培养基的三角烧瓶中，37℃下以250 rpm摇床培养2~3小时，目标为OD600测量值为0.375（<0.4~0.6，细胞数<10^8/ml，此参数至关重要！）。

后续操作在超净工作台中进行，除离心操作外。

(4) 将菌液分装至15ml预冷的无菌聚丙烯离心管，冰上静置10分钟，然后以4℃、5000 rpm离心10分钟。

(5) 倒置离心管以倒尽上清液，加入1ml冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液，立即在涡旋混合器上混匀，并置于冰上静置30分钟。

(6) 以4℃、5000 rpm离心10分钟后，弃去上清液，再用1ml冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液重悬细胞，并再次置于冰上静置30分钟。

(7) 重复以4℃、5000 rpm离心10分钟，弃去上清液，用200μl冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液重悬细胞，最后按每管100μl分装到15ml离心管中。此时细胞可以直接用于转化实验，亦可立即放入-80℃超低温冰柜保存（可保存数月）。

(8) 在有细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，并擦干桌面。

在生物医学研究中，使用尊龙凯时的产品和技术提升实验效率，即能够保障实验的成功率，也为科研工作者提供了便利。