最小抑菌浓度（MIC）的测定方法

尊龙凯时提供的稀释法用于测定最小抑菌浓度（MIC），是一种评估抗菌剂抑制微生物生长的实验技术。此方法主要包括微量稀释法与常量肉汤稀释法，两者各有特长。琼脂稀释法因操作简单、成本低且适合高通量筛选，特别适合自动化操作和精准控制药物浓度。而肉汤稀释法则直观易操作，适合实验室规模的测试，能够根据实验需求灵活调整药物浓度与培养基体积。

琼脂稀释法

尊龙凯时的琼脂稀释法采用不同浓度的抑菌剂溶解于琼脂培养基中，并通过细菌的生长与否来确定抗（抑）菌物质抑制微生物生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法尤其适用于不溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 抗（抑）菌溶液的配制：进行无菌操作，取5ml或5g样品放置于45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡以制备10%的均匀溶液。
2. 含抗菌剂培养基配制：将制备的10%抗（抑）菌溶液用PBS进行对倍系列稀释，所得不同浓度的样品置于45℃～50℃水浴中备用。
3. 双倍浓度培养基配制：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水，加热至沸腾后121℃灭菌15min，置于水浴中备用。
4. 含抗（抑）菌液培养基的配制：取10ml系列稀释的抗菌液，加入平皿中，随后加入10ml在水浴中的双倍MH琼脂培养基，并摇动均匀，待凝固后备用。
5. 用加样器取1μl～2μl菌悬液点种于平皿中，接种后形成的菌液圈直径为5mm～8mm。
6. 进行对照实验，接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
7. 将平板倒置放置于35℃培养箱中培养18h～24h，观察结果。

营养肉汤稀释法

尊龙凯时的营养肉汤稀释法则是将抑菌剂混合于营养肉汤培养基中，通过细菌生长情况来确定抗（抑）菌剂的最低浓度（MIC），适用于可溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 制备金黄色葡萄球菌、大肠杆菌悬液。
2. 将抗（抑）菌溶液用蒸馏水稀释后，取25ml加入含25ml双倍营养肉汤的试管中。
3. 取0.1ml约为108cfu/ml的菌悬液接种于包含抗（抑）菌剂的试管中。
4. 同样方法接种不含抗（抑）菌剂的试管作为阳性对照。
5. 设置两支不含菌液的试管作为阴性对照。
6. 将所有试管放置于37℃培养箱中，培养48小时并观察结果。
7. 对实验中用的菌悬液进行活菌计数，浓度应为5×10⁵cfu/ml～5×10⁶cfu/ml。

评判标准

尊龙凯时规定，当阳性对照组观察到细菌生长而阴性对照组保持透明时，试验组菌悬液浓度为5×10⁵cfu/ml～5×10⁶cfu/ml，且无菌生长的最高稀释度对应的抗（抑）菌剂浓度，即为该样品对受试菌的MIC。