病毒载体凭借其高效递送CRISPR组分的优势，已成为基因治疗研究中一种不可或缺的重要工具，尤其适合那些转染难度较高的分化细胞。不同类型的病毒载体也能实现高效的体内递送，尽管其生产工艺复杂且成本较高，这在一定程度上限制了其广泛应用。相比质粒，病毒载体的生产需要额外的步骤：首先将CRISPR组分克隆到转移载体中，然后再将其包装成病毒颗粒。这种劳动密集型的特性无疑增加了规模化生产的难度。目前，主流的CRISPR递送载体包括慢病毒、腺相关病毒（AAV）和腺病毒，各自具有不同的转导效率、免疫原性和载体容量，因此在选择适用类型时需根据实验目标做出合理判断。

基于慢病毒的递送方式

慢病毒由于其与电穿孔相当的基因递送效率，成为CRISPR组分递送领域中的热门选择，特别在大规模CRISPR文库的筛选上表现优异。其优势在于能够将转基因整合至宿主的基因组中以实现长期表达，这对过表达实验尤为重要。然而，基因组整合所引发的插入突变风险限制了其在临床中的应用，目前主要用于基础研究和体外基因修饰，例如FDA批准的CAR-T癌症疗法及治疗β-地中海贫血症的Zynteglo。需要注意的是，慢病毒在递送CRISPR时，Cas9的持续表达可能引发脱靶效应，而可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）可以有效缓解这一问题——IDLV将基因组整合率降低约500倍，尽管其转导效率低于常规慢病毒，但在体外和体内神经元中的递送效率却与常规载体相当，这为治疗中枢神经系统疾病提供了独特的潜力。

基于AAV的递送方式

AAV系统目前面临两个主要技术瓶颈：首先是载体容量限制（约42kb），远低于慢病毒的装载能力；其次是转导效率相对较低。为了解决容量限制的问题，研究者们发展了多重解决方案，例如采用较小序列的SaCas9、双载体共递送策略来分别装载Cas9和gRNA，以及SpCas9的分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段以在细胞内形成完整的功能蛋白。值得一提的是，AAV系统具备独特的临床优势：多样化的血清型选择使其能够实现组织特异性的靶向，结合衣壳定向进化技术（通过体外或体内筛选优化衣壳蛋白），能够进一步提升递送的精准度和治疗效果。虽然目前尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，但该平台在其他基因药物如脊髓性肌萎缩治疗药物Zolgensma®的应用中，展示了成功的临床转化潜力，为CRISPR-AAV疗法的未来发展提供了重要参考。

基于腺病毒的递送方式

腺病毒的基因递送系统因其非整合特性，在安全性方面表现突出，经过多项临床试验的验证后，已成为慢病毒的有效替代选择。相较于AAV和慢病毒载体，腺病毒具备显著的扩增装载能力，但其高免疫原性可能会影响基因编辑的效果。目前，临床应用广泛的Ad5血清型依赖CAR受体介导细胞转导，这在一定程度上限制了其组织适用性。最近研发的Ad5/F35嵌合体成功突破了对CAR受体的依赖，同时gutless腺病毒载体（仅保留必要的包装序列）不仅降低了免疫原性，还扩增了载体容量（可达33kb），非常适合表达较长或多个转基因。在临床转化方面，腺病毒载体展现了多重突破：在遗传病领域，EBT-101作为首款静脉注射型的CRISPR-HIV治疗载体，已启动I/IIa期临床试验；在肿瘤治疗方面，多项临床前研究证实了其在实体瘤靶向中的优势。值得注意的是，虽然FDA已批准首款腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法仍处于临床实验阶段。

总之，随着各种病毒载体技术的发展，基因治疗的前景愈加广阔，特别是在像尊龙凯时这样的品牌的推动下，相关研究不断取得新进展，期待其能为更多患者带来福音。