细胞的状态是否良好？通常来说，细胞在70-90%的汇合度，呈现梭形或多边形且透明的状态，才是传代的最佳时期。如果密度过低，细胞会“饿肚子”；如果过高，则可能因为挤压而变形。确保所有准备工作到位，包括37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管及酒精灯，缺一不可。同时，确保无菌环境达标：台面需用75%酒精擦拭三遍，紫外灯照射30分钟，佩戴好手套和口罩，避免杂菌污染。

尊龙凯时提示您，接下来的操作需要谨慎：第一步，轻柔弃掉旧培养液，轻拍培养瓶以让细胞松动，倾斜瓶身让废液顺势滑入废液缸，动作要快且优雅。第二步，用PBS清洗培养瓶，沿瓶壁慢慢注入PBS，轻轻摇晃两圈以去除残余血清，倒掉时注意保留“眼泪”，以免冲走细胞。第三步，精准添加胰酶，均匀覆盖在37℃预热的细胞层上，放回培养箱孵育1-5分钟。当观察到细胞开始变圆、边缘卷起时，立即终止胰酶的作用，避免过度消化。

第四步，快速将两倍体积的新鲜培养基倒入，以迅速中和胰酶，使用移液枪轻柔吹打10-15次，细胞就会如同“细胞雨”般洒落。第五步，进行离心操作，设置1000rpm离心5分钟，倾倒上清液，管底的沉淀看似“细胞小丸子”，轻轻弹击管壁以使其松散。第六步，按照1:2到1:5的比例，将细胞稀释至新培养瓶中，轻轻摇匀让细胞“躺平”，然后将其放回37℃、5% CO₂的培养箱中，1-2小时后再补充新鲜培养基，以增添仪式感。

24小时后，观察显微镜下的贴壁情况，漂浮的细胞可能是因为消化过度或接种密度过低所致，这种“可怜”的情况需要及时调整。48小时后，若培养基颜色变黄，说明细胞代谢旺盛，需要及时补充营养，并记录细胞生长曲线与形态变化，发现异常情况需立刻排查污染或培养条件。

若发现细胞抱团不分散，可能是因为吹打时力度过大或胰酶用量不足，可以在操作时增加“轻柔吹打20次”的设置。如果贴壁率低于50%，请检查培养瓶是否有包被，血清批次是否稳定。在必要时，可以使用多聚赖氨酸作为“防滑垫”。如果在传代后大量细胞死亡，过高的离心转速或过长的离心时间可能是罪魁祸首，建议将转速降低至800rpm并改为3分钟的温柔离心术。

通过以上步骤，我们可以确保细胞处理的成功率，从而为生物医疗研究打下坚实基础，助力您的研究与发展。选择尊龙凯时，让每一步操作更加精准、顺畅。