培养条件：细胞培养所需的培养基为DMEM，加入10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/链霉素（P/S），适合贴壁细胞的培养。培养温度设定为37℃。对于细胞的传代，首次建议采用1:2的比例。更新培养基的建议周期为每两天一次。为确保细胞在运输过程中得到良好的保护，建议同时购买配套的培养基，以获得优惠。在接收到细胞后，进行处理并培养至健康状态时，最好注满完整的培养基并封好瓶口。

细胞处理注意事项：在接收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后将其置于超净台内以确保严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞的生长情况，并对不同倍数进行拍照保存（建议拍摄40x、100x和200x分别各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞传代步骤：在细胞生长时，如汇合度未超过80%，应将培养基收集至离心管中，保留5ml培养基并放置于37℃、5% CO2孵箱中培养。如细胞密度超过80%，可进行传代操作。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞呈圆形并脱落，则迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清，重悬，加1-2ml完全培养基。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤：1. 若进行半换液法，将培养瓶立放于培养箱中静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基后补加3ml的完全培养基。如果培养基变色较慢，可以直接加入约500ul FBS。在传代时可以直接补给5ml培养基分到两个培养瓶中，通常经过三次这样传代后应进行一次离心，以去除死细胞。
2. 离心换液法：若需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中在1000rpm离心5分钟，弃去上清，重悬并均匀混合，按1:2比例分到新T25瓶中，同时添加6-8ml根据说明书配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力。后续传代可根据实际情况调整比例为1:2至1:5。

细胞冻存步骤：1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS进行洗涤；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻观察，待细胞回缩、圆形后迅速加入5ml完全培养基终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml强效无血清冻存液（如尊龙凯时产品），充分混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续需要转入液氮罐，应在-80℃冰箱中存放24小时后再进行转移。

细胞复苏步骤：1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，待冻存管内无结晶时，用75%的酒精擦拭管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；
4. 次日，使用新鲜完全培养基继续培养。注意：部分细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这通常是正常的。如发现脱离量较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行离心以去除死细胞，并通过补加胰酶及完全培养基进行细胞的再处理。同时应按照1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后再次放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。